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分散酶II可應用于組織的解離

更新時間:2022-06-01      點擊次數(shù):1281
分散酶II(中性蛋白酶)是一種氨基酸內肽酶,可水解非極性氨基酸殘基的 N 端肽鍵。該序列常見于膠原蛋白。分散酶II 具有溫和的蛋白水解作用,可用于原代細胞的分離和常規(guī)傳代。分散酶II 相對溫和,在生理溫度和 pH 值下具有良好的解離能力,通常可維持細胞膜完整性。

分散酶II能快速有效且溫和的破壞組織細胞外基質釋放單細胞培養(yǎng)物(原代細胞培養(yǎng)物)或收集已培養(yǎng)的細胞將其轉移到新的培養(yǎng)基質上(傳代培養(yǎng))。

分散酶II可應用于組織的解離,具體步驟如下:

1、用無菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊。

2、用無菌PBS清洗組織塊。

3、向上述組織塊中加入Dispase II溶液( 工作濃度為0.6-24U/ml),并確保組織塊全部浸沒于Dispase溶液中。

4、37°C孵育,孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。(若*一次使用該酶,可通過細胞計數(shù)來確定需要的總孵育時間。一般對于較難解離組織,1h即可達到分離目的,但更長時間(如數(shù)小時)的孵育也不會明顯影響細胞活性。)

5、如有需要,可將上述消化產(chǎn)物通過無菌不銹鋼網(wǎng)篩過濾,以分開單細胞與殘留的組織塊?;蛘叽髩K組織沉淀后輕輕倒出上層細胞,若是需要,換用新鮮dispase溶液以進一步解離殘留組織。

6、離心沉淀細胞,倒掉酶溶液;

7、用培養(yǎng)基重懸細胞沉淀,并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細胞。

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